Définition
Aseptie
L'absence de micro-organismes potentiellement pathogènes dans une environnement donné, notamment lors des manipulations en laboratoire.
Culture cellulaire
La technique qui consiste à maintenir et à faire croître des cellules vivantes en dehors de leur organisme d'origine dans des conditions contrôlées.
Eucaryote
Se dit des organismes dont les cellules possèdent un noyau renfermant le matériel génétique.
Les principes de base de l'aseptie
L'aseptie est un principe fondamental en culture cellulaire qui vise à prévenir toute contamination microbienne. Pour ce faire, il est essentiel de travailler dans un environnement stérile, généralement dans une hotte à flux laminaire ou un environnement stérile dédié. Les techniciens doivent porter des équipements de protection individuels (EPI) tels que des gants, des blouses et des masques pour éviter toute introduction de micro-organismes. L'utilisation de solutions désinfectantes pour nettoyer les surfaces de travail et les instruments est également cruciale pour maintenir un environnement aseptique.
Le matériel et les techniques employés pour garantir une aseptie en culture cellulaire
L'équipement de base pour une culture cellulaire aseptique inclut une hotte à flux laminaire, qui permet de créer un courant d'air stérile autour de l'espace de travail. Les instruments utilisés, tels que les pipettes et les milieux de culture, doivent être préalablement stérilisés, généralement par autoclave ou par filtration stérilisante.
Les chercheurs doivent maîtriser des techniques spécifiques telles que l'ensemencement stérile et le passage des cellules, qui impliquent de manipuler les cellules sans introduire de contaminants. Le verrouillage hermétique des flacons de culture et la surveillance continue des cultures pour toute indication de croissance microbienne, comme des changements de couleur ou de pH, sont d'autres pratiques courantes.
La prévention des contaminants courants
Les contaminations les plus fréquentes en culture cellulaire concernent les bactéries, les champignons et parfois les mycoplasmes. Les mycoplasmes sont particulièrement insidieux car ils sont difficiles à détecter et peuvent affecter les résultats expérimentaux en modifiant le métabolisme cellulaire. La prévention de ces contaminants repose sur l'observation stricte des pratiques aseptiques et l'utilisation systématique de tests de détection des mycoplasmes, par exemple via PCR ou par culture spécifique.
Les bonnes pratiques de nettoyage de laboratoire incluent la désinfection quotidienne des surfaces, le traitement des contaminations dès leur apparition et la mise en quarantaine des cultures suspectes. Un contrôle régulier de la stérilité de l’environnement et l’utilisation de réactifs de qualité certifiée aidant à minimiser les risques de contamination.
Impacts de la contamination en culture cellulaire eucaryote
La contamination peut avoir de multiples effets néfastes sur les cultures cellulaires et, par extension, sur les résultats de recherche. Elle peut fausser les résultats d'expériences en modifiant la physiologie des cellules ou en introduisant des artefacts. Dans certains cas, les cellules contaminées doivent être détruites, entraînant une perte de temps et de ressources. La sensibilisation à l'importance de l'aseptie et la formation continue du personnel sont donc essentielles pour prévenir ces conséquences coûteuses.
A retenir :
En résumé, l'aseptie est un pilier crucial de la culture cellulaire eucaryote. Elle requiert une combinaison de matériel adéquat, de techniques précises et de pratiques rigoureuses pour éviter toute contamination microbienne. Les enjeux d'une bonne aseptie sont majeurs, tant au niveau de la validité scientifique des expériences que de la conservation des ressources et du temps dans les laboratoires.
