• Qu'est-ce qu'un ADN recombinant (ADNr)?

Un ADN recombinant permet d'insérer une portion d'ADN, comme un gène ou une séquence, dans un autre ADN. il est possible d'intégrer une séquence humaine dans un ADN qui n'est pas humain.

Le clonage moléculaire permet d'amplifier et d'obtenir des quantités illimitées d'ADN recombinant.

• Comment obtenit un ADN recombinant?

1l faut sélectionner une séquence d'ADN et l'insérer dans un vecteur.

Les vecteurs peuvent varier en fonction de l'application souhaitée.

Une fois le vecteur propagé dans un tôte, on peut produite des quantités illimitées d'ADN recombinant.

• Applications thérapeutiques et sante

Le génie génétique permet de produire de nouveaux médicaments appelés biomédicaments.

Des médicaments issus du génie génétique, comme l'insuline, sont utilisés pour traiter certaines pathologies.

Le génie génétique est également utilisé en thérapie génique et cellulaire pour remplacer ou modifier des, genes à des fins thérapeutiques.

• Obtention de l'ADN recombinant

On peut obtenir un ADN recombinant à partir de l'ADN génomique ou de l'ARN messager.

L'ADN génomique peut être extrait d'une cellule et digere pour obtenir des fragmesis d'ADN d'intérêt.

L'ARN messager peut être utilisé pour synthétiser un ADN complémentaire à la séluence d'intérêt.

• Clonage de l'ADN dans un vecteur

Les vecteurs de clonage ont des caractéristiques communes, comme une origine de réplication, un marqueur de sélection et un site de clonage multiple.

Différents types de vecteurs peuvent être utilisés, tels que les plasmides et les particules virales.

Le clonage dans un vecteur plasmidique permet d'obtenir un ADN recombinant qui peut être amplifié et produit en quantités illimitées.

• Les cellules hôtes

Les bactéries sont souvent utilisées comme cellules hôtes pour le clonage de plasmides.

Les bactéries compétentes sont des souches modifiées pour produire des protéines recombinantes.

Les cellules de mammifères et les levures peuvent également être utilisées comme cellules hôtes.

• Coupure par les enzymes de restriction

Les enzymes de restriction coupent l'ADN donneur et le vecteur à des sites spécifiques.

Il est important de choisir les enzymes de restriction appropriées pour obtenir des extrémités compatibles.

Les enzymes de restriction vont couper des séquences inversées répétées, qu'on appelle palindrome.

• Ligation

La ligase est une enzyme qui va permettre de recréer des liaisons esters entre les 2 bouts.

La ligation va permettre la reconstitution des liaisons pour obtenir un ADN double brin.

• Introduction du plasmide dans la cellule hôte.

Il faut cloner l'ADN recombinant. Le plasmide recombinant doit être introduit dans une cellule hôte, comme une bactérie.

Différentes techniques, telles que l'électroporation ou les chocs thermiques, peuvent être utilisées,

Cela permet de faire pénétrer le plasmide à l'intérieur de la cellule hôte.

• Amplification et criblage des bactéries

Le criblage des bactéries est une étape essentielle pour obtenir une bactérie contenant le plasmide recombinant.

On utilise l'ampicilline pour sélectionner la bactérie qui a le plasmide, mais il peut être recombinant ou non recombinant.

Le second criblage va sélectionner les bactéries qui possèdent uniquement le plasmide recombinant.

Différentes techniques de criblage peuvent être utilisées, telles que la PCR, les profils enzymatiques de restriction et les sondes spécifiques.

Le criblage par PCR consiste à cultiver les bactéries dans un gel avec de l'ampicilline pour identifier les clones positifs.

Le criblage par profil de restriction utilise des enzymes de restriction pour isoler l'ADN et le faire migrer sur un gel

d'agarose.

Certains plasmides particuliers permettent de détecter directement les bactéries contenant le plasmide recombinant. Lac-Z est un gène qui va coder pour l'enzyme Beta galactosidase. les bactéries bleues exprime Beta-gal cad plasmide non recombinant et les bactéries blanches ne l'exprime pas donc plasmide recombinant.

• Vérification de l'ADN recombinant

Il est important de vérifier l'ADN recombinant pour s'assurer de la présence de l'insert.

Il faut faire la distinction entre le vecteur de clonage et le vecteur d'expression.

Le vecteur de clonage permet d'amplifier l'ADN recombinant, tandis que le vecteur d'expression permet l'expression d'une protéine.

• Conclusion et applications de l'ADN recombinant

Le clonage permet d'obtenir de nombreuses copies d'ADN recombinant.

L'ADN recombinant est utilisé pour produire des protéines recombinantes et des médicaments, Il est également utilisé dans la thérapie génique et la thérapie cellulaire.

Le clonage peut également être utilisé pour créer des sondes et des banques d'ADN génomique

L'ADN recombinant est largement utilisé dans les laboratoires pour différentes applications