Exemple de sonde
Nick translation (ou translation de brèches):
Utilisation de:
Random Priming ou Oligolabelling (ou multi-amorçage):
PCR:
Marquages en 5' ou en 3':
Rappels concernant l'hybridation:
Le Tm= température à laquelle on a 50% d'hydridation (50% sb et 50% db)
Il dépend de la composition et de la longueur du fragment, et de la salinité du milieu
Il est égal à: Tm= 2* (A+T) + 4*(G+C)
Pour rappel, à 260 nm, l'ADN sb absorbe plus que le double brin car les bases sont plus accessibles donc DO sb > DO db
1 DO à 260 nm= 50 µg/ml d'ADN db ou 35 µg/ml d'ARN sb car ARN= plus instable
A retenir:
sondes nucléotidiques, random priming ou oligolabelling, nick translation, pcr, terminal transferase, polynucléotide kinase
Site utile:
http://acces.ens-lyon.fr/biotic/biomol/outilsbm/html/marqsond.htm#:~:text=Marquage%20par%20translation%20de%20coupure(Nick%20Translation)%20%3A&text=I%20pour%20d%C3%A9grader%20l'ADN,pr%C3%A9sence%20d'un%20nucl%C3%A9otide%20chaud.
Exemple de sonde
Nick translation (ou translation de brèches):
Utilisation de:
Random Priming ou Oligolabelling (ou multi-amorçage):
PCR:
Marquages en 5' ou en 3':
Rappels concernant l'hybridation:
Le Tm= température à laquelle on a 50% d'hydridation (50% sb et 50% db)
Il dépend de la composition et de la longueur du fragment, et de la salinité du milieu
Il est égal à: Tm= 2* (A+T) + 4*(G+C)
Pour rappel, à 260 nm, l'ADN sb absorbe plus que le double brin car les bases sont plus accessibles donc DO sb > DO db
1 DO à 260 nm= 50 µg/ml d'ADN db ou 35 µg/ml d'ARN sb car ARN= plus instable
A retenir:
sondes nucléotidiques, random priming ou oligolabelling, nick translation, pcr, terminal transferase, polynucléotide kinase
Site utile:
http://acces.ens-lyon.fr/biotic/biomol/outilsbm/html/marqsond.htm#:~:text=Marquage%20par%20translation%20de%20coupure(Nick%20Translation)%20%3A&text=I%20pour%20d%C3%A9grader%20l'ADN,pr%C3%A9sence%20d'un%20nucl%C3%A9otide%20chaud.