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Post-Bac
4

Les différents types de banques d'ADN

Génétique

Définitions

Banques d'ADN
Ensemble de clones, généralement bactériens, rarement des levures, qui représentent le génome le plus complet que possible ou l'ensemble des ARNm d'une cellule.

Exemple de banques d'ADN

Protocole:

  • Préparer un vecteur (utilisation de deux ER différentes)
  • Préparer l'insert
  • Utiliser la phosphatase alcaline (déphosphoriler le 5'P)
  • Mettre en contact le fragment d'intérêt x et le vecteur
  • Ajouter la ligase
  • Préparer les cellules hôtes en les rendant compétentes
  • Faire pénétrer le vecteur recombinant dans la cellule
  • Etaler sur boîte, les cultiver, les sélectionner etc etc


Banque génomique:

  • Contient des fragments de l'ADN d'un organisme obtenus par sonication ou digestion partielle par ER
  • L'ensemble des fragments représente l'ensemble du génome


Banque d'ADNc:

  • Contient l'ensemble des ARNm d'une cellule ou d'un tissu, sous forme de copies d'ADN
  • Au moins une copie de chaque ARNm de la cellule ou du tissu
  • Spécifique d'une lignée cellulaire ou d'un tissu donné, à un moment et état physiologique donnés


Obtention de l'ADN à partir d'ADNc:

  • Utilisation de l'oligodT pour l'hybridation avec la queue poly A
  • Rétrotranscription grâce à une transcriptase inverse + 4 dNTP
  • Synthèse de l'ADNc
  • Ajout de la RNase H (dégradation de l'ARN sb)
  • Ajout d'une ADN polymérase + 4 dNTP (polymérisation à partir de certaines hybridations)
  • Ajout de nucléase S1 et obtention d'un ADN db


À retenir :

Liens utiles:

http://biotech-btk.wifeo.com/les-banques-adn.php#1123


Post-Bac
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Les différents types de banques d'ADN

Génétique

Définitions

Banques d'ADN
Ensemble de clones, généralement bactériens, rarement des levures, qui représentent le génome le plus complet que possible ou l'ensemble des ARNm d'une cellule.

Exemple de banques d'ADN

Protocole:

  • Préparer un vecteur (utilisation de deux ER différentes)
  • Préparer l'insert
  • Utiliser la phosphatase alcaline (déphosphoriler le 5'P)
  • Mettre en contact le fragment d'intérêt x et le vecteur
  • Ajouter la ligase
  • Préparer les cellules hôtes en les rendant compétentes
  • Faire pénétrer le vecteur recombinant dans la cellule
  • Etaler sur boîte, les cultiver, les sélectionner etc etc


Banque génomique:

  • Contient des fragments de l'ADN d'un organisme obtenus par sonication ou digestion partielle par ER
  • L'ensemble des fragments représente l'ensemble du génome


Banque d'ADNc:

  • Contient l'ensemble des ARNm d'une cellule ou d'un tissu, sous forme de copies d'ADN
  • Au moins une copie de chaque ARNm de la cellule ou du tissu
  • Spécifique d'une lignée cellulaire ou d'un tissu donné, à un moment et état physiologique donnés


Obtention de l'ADN à partir d'ADNc:

  • Utilisation de l'oligodT pour l'hybridation avec la queue poly A
  • Rétrotranscription grâce à une transcriptase inverse + 4 dNTP
  • Synthèse de l'ADNc
  • Ajout de la RNase H (dégradation de l'ARN sb)
  • Ajout d'une ADN polymérase + 4 dNTP (polymérisation à partir de certaines hybridations)
  • Ajout de nucléase S1 et obtention d'un ADN db


À retenir :

Liens utiles:

http://biotech-btk.wifeo.com/les-banques-adn.php#1123