Post-Bac
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Généralités Génie Génétique
Génie génétique
Définitions
Principe
Utiliser un vecteur ("véhicule") dans le but d'y insérer une séquence d'un gène d'intérêt. On transforme une cellule avec pour qu'il y ait multiplication et propagation du fragment dans les prochaines générations.
-> faire s'exprimer un gène
-> faire produire une protéine
-> étudier l'interaction entre les gènes (régulation génique)
Schéma illustratif
Différentes étapes:
- digestion par des enzymes de restriction (endonucléases +++)
- digestion du vecteur vide
- ligature par une ligase (obtention d'un vecteur recombinant)
- introduction dans la cellule hôte (perméation par CaCl2 + choc thermique ou électrique pour les procaryotes, biolistique, électroporation, lipofection pour les eucaryotes)
Obtention d'une bactérie transformée
- Réplication/ multiplication de la bactérie
- sélection des clones recombinants ou de la colonie sur milieu sélectif
Parfois suivi de culture de la colonie obtenue, de la réintroduction dans une espèce etc etc
À retenir :
Mots-clés:
vecteur, enzymes de restriction, réplication, sélection, gène d'intérêt
transformation (cellule procaryote), transfection (cellule eucaryote), transduction ou infection (virus)
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Généralités Génie Génétique
Génie génétique
Définitions
Principe
Utiliser un vecteur ("véhicule") dans le but d'y insérer une séquence d'un gène d'intérêt. On transforme une cellule avec pour qu'il y ait multiplication et propagation du fragment dans les prochaines générations.
-> faire s'exprimer un gène
-> faire produire une protéine
-> étudier l'interaction entre les gènes (régulation génique)
Schéma illustratif
Différentes étapes:
- digestion par des enzymes de restriction (endonucléases +++)
- digestion du vecteur vide
- ligature par une ligase (obtention d'un vecteur recombinant)
- introduction dans la cellule hôte (perméation par CaCl2 + choc thermique ou électrique pour les procaryotes, biolistique, électroporation, lipofection pour les eucaryotes)
Obtention d'une bactérie transformée
- Réplication/ multiplication de la bactérie
- sélection des clones recombinants ou de la colonie sur milieu sélectif
Parfois suivi de culture de la colonie obtenue, de la réintroduction dans une espèce etc etc
À retenir :
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transformation (cellule procaryote), transfection (cellule eucaryote), transduction ou infection (virus)
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