TP : transformation bactérienne | Partielo

Définition

Transformation bactérienne

Elle correspond à l'introduction d'ADN exogène dans une bactérie, généralement un plasmide, afin de lui conférer un nouveau caractère génétique.

Bactérie compétente

Bactérie où l'état physiologique garantira une efficacité maximum de transformation.

A retenir :

Eléments clés d'un plasmide :

ORI (origine de réplication) : permet la réplication autonome
Gène de résistance : sert à sélectionner les transformants
Site de clonage multiple : contient des sites de restrictions pour insérer un gène d'intérêt
Promoteur : régule l'exposition du gène introduit

Schéma du plasmide pGLO

Eléments présents dans pGLO

GFP => gène de la protéine fluorescente
ori => origine de réplication
bla (AmpR) => gène de la béta-lactamase conférent la résistance à l'ampicilline
Promoteur pBAD => active la transcription de GFP en présence d'arabinose
araC => régulateur qui contrôle pBAD et activité qui dépend d'arabinose
MCS => région permettant l'insertion d'autres gènes

En absence d'arabinose -> araC bloque pBAD -> pas de GFP

En présence d'arabinose -> activation de pBAD -> expression de GFP

A retenir :

ATTETION

Bien respecter la stérilité du milieu et et des instruments utilisés.
Bien respecter les temps indiqué
Bien respecter les températures d'exposition indiquées

Définition

Transformation bactérienne

Elle correspond à l'introduction d'ADN exogène dans une bactérie, généralement un plasmide, afin de lui conférer un nouveau caractère génétique.

Bactérie compétente

Bactérie où l'état physiologique garantira une efficacité maximum de transformation.

A retenir :

Eléments clés d'un plasmide :

ORI (origine de réplication) : permet la réplication autonome
Gène de résistance : sert à sélectionner les transformants
Site de clonage multiple : contient des sites de restrictions pour insérer un gène d'intérêt
Promoteur : régule l'exposition du gène introduit

Schéma du plasmide pGLO

Eléments présents dans pGLO

GFP => gène de la protéine fluorescente
ori => origine de réplication
bla (AmpR) => gène de la béta-lactamase conférent la résistance à l'ampicilline
Promoteur pBAD => active la transcription de GFP en présence d'arabinose
araC => régulateur qui contrôle pBAD et activité qui dépend d'arabinose
MCS => région permettant l'insertion d'autres gènes

En absence d'arabinose -> araC bloque pBAD -> pas de GFP

En présence d'arabinose -> activation de pBAD -> expression de GFP

A retenir :

ATTETION

Bien respecter la stérilité du milieu et et des instruments utilisés.
Bien respecter les temps indiqué
Bien respecter les températures d'exposition indiquées

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